多肽的二維色譜分離研究
Separation of peptides by two-dimensional chromatographic

1.2萬(wàn)字 32頁(yè) 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)


摘 要
目的: 以二維液相色譜為核心手段，結(jié)合其他分離技術(shù)，建立蛋白水解物為代表的多組分體系的分離方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)多元組分的分離。從而進(jìn)一步分析多元組分中各組分的活性，為工業(yè)化生產(chǎn)活性多肽時(shí)建立產(chǎn)品品質(zhì)控制體系積累一定的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，最終建立工業(yè)化多肽生產(chǎn)過程的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。
方法: 一維下，通過對(duì)乙腈和水的比例，流動(dòng)相中三氟乙酸比例，以及流速的篩選確定色譜柱條件為KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(80∶20)；流速為0.6mL/min，柱溫為25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm；進(jìn)樣量10μL；通過十通閥門的切換來(lái)實(shí)現(xiàn)二維。經(jīng)篩選分子量10K部分切換時(shí)間為4min5min6min7min9min，10min。二維下，色譜條件為右泵色譜柱為KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm)，左泵色譜柱為凝膠柱；右泵流動(dòng)相為乙腈-水（各含0.1%的三氟乙酸），左泵流動(dòng)相為0.02%的曡氮鈉溶液 ，；右泵流速為0.3mL/min，左泵流速為0.6mL/min，柱溫為25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm；進(jìn)樣量10μL；
結(jié)果：通過二維液相后，分子量小于3K的組分峰數(shù)量由4個(gè)變成8個(gè)，平均峰面積102.064mAUR26;min變成754.335mAUR26;min，時(shí)間跨度由0.955min變成3.5min。分子量小于5K的組分峰數(shù)量由5個(gè)變成6-7個(gè)，平均峰面積139.877mAUR26;min變成2362.554mAUR26;min，時(shí)間跨度由1.165min變成4.927min。分子量大于10K的組分峰數(shù)量由2個(gè)變成7-8個(gè)，平均峰面積23.0365mAUR26;min變成2164.508mAUmR26;in，時(shí)間跨度由1.047min變成4.186min?？梢娫诜鍞?shù)量，均峰面積和均峰時(shí)間跨度上，3種樣品均有增加。
討論：該方法可用于玉米多肽分子量10K等多組分的分離


關(guān)鍵詞：高效液相色譜；二維；蛋白含量測(cè)定；超聲；純化