宏基因組木醋桿菌木糖醇脫氫酶基因的克隆及序列分析.doc
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宏基因組木醋桿菌木糖醇脫氫酶基因的克隆及序列分析,摘 要木糖醇是一種天然糖醇,可作為蔗糖的代替品,也可制取表面活性劑、乳化劑、破乳劑、醇酸樹脂及涂料,廣泛用于醫(yī)藥工業(yè)制造各種藥物的原料、糖尿病患者食品的生產(chǎn)及食品、醫(yī)藥等行業(yè)。以資源豐富的葡萄糖為底物生產(chǎn)木糖醇越來越受到人們的重視。但是葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)的d-阿拉伯糖醇轉(zhuǎn)化生...
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宏基因組木醋桿菌木糖醇脫氫酶基因的克隆及序列分析
摘 要
木糖醇是一種天然糖醇,可作為蔗糖的代替品,也可制取表面活性劑、乳化劑、破乳劑、醇酸樹脂及涂料,廣泛用于醫(yī)藥工業(yè)制造各種藥物的原料、糖尿病患者食品的生產(chǎn)及食品、醫(yī)藥等行業(yè)。以資源豐富的葡萄糖為底物生產(chǎn)木糖醇越來越受到人們的重視。但是葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)的D-阿拉伯糖醇轉(zhuǎn)化生成木糖醇的轉(zhuǎn)化率較低,限制了葡萄糖對木糖醇的轉(zhuǎn)化。木糖醇脫氫酶,作為D-阿拉伯糖醇轉(zhuǎn)化為木糖醇的生物轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶之一,在木酮糖轉(zhuǎn)化為木糖醇的過程中起著至關(guān)重要的作用。
本研究將從鎮(zhèn)江恒順醬醋廠取得的醋醩進行富集培養(yǎng)后,利用改良后的提取方法獲得了宏基因組DNA;根據(jù)GenBank中的Gluconobacter xylinus的木糖醇脫氫酶序列,設(shè)計引物,以宏基因組DNA為模板擴增得到全長基因,與T載體連接后進行測序,結(jié)果分析表明,木糖醇脫氫酶基因長度約800bp,與GenBank中已報道的G. xylinus木糖醇脫氫酶基因序列有最高相似性達93%(氨基酸序列相似性為95%),與Gluconobacter oxydans的木糖醇脫氫酶基因序列相似性為72.9%(氨基酸序列相似性為73%),可以確定所克隆的序列為木糖醇脫氫酶基因。序列分析顯示,該基因起始密碼子為:ATG,終止密碼子為:TAA,序列包含有4個潛在的ORF編碼信息。G. xylinus木糖醇脫氫酶含