摘   要

   

    木糖醇是一種天然糖醇，被人體吸收無(wú)副作用，可作為蔗糖的替代品。此外，木糖醇被廣泛地應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域，其需求量在國(guó)內(nèi)外日益增大。近年來(lái)，以資源富足的葡萄糖作為底物轉(zhuǎn)化生成木糖醇的微生物合成法受到人們重視。但其轉(zhuǎn)化效率不容樂觀，而木糖醇脫氫酶（XDH）是影響生物合成木糖醇的關(guān)鍵酶，對(duì)Gluconacetobacter diazotrophicus木糖醇脫氫酶基因進(jìn)行分析和特點(diǎn)研究，可以為構(gòu)建高活力XDH工程菌提供基礎(chǔ)。

論文以水果市場(chǎng)的普通甘蔗根部為材料，提取宏基因組，設(shè)計(jì)引物并通過PCR擴(kuò)增G. diazotrophicus木糖醇脫氫酶基因，連接T載體并進(jìn)行測(cè)序分析。分析結(jié)果顯示，所獲得的克隆基因長(zhǎng)度約為800bp,與GenBank已報(bào)道的G. diazotrophicus PAl 5的木糖醇脫氫酶基因的序列相似度為99%;其氨基酸序列與GenBank 已報(bào)道的G. diazotrophicus PAl 5的脫氫酶的氨基酸序列相似度為99%；而與Gluconobacter oxydans 621H的木糖醇脫氫酶有74%的相似性。其中，起始密碼子是：ATG，終止密碼子為：TAA，序列包括3個(gè)潛在的ORF編碼信息，并發(fā)現(xiàn)不能切割此序列的常用限制性內(nèi)切酶有Hind III，Nco I。同時(shí)，本研究對(duì)木糖醇脫氫酶的氨基酸序列進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示該酶含有二十種氨基酸