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摘 要
喜樹毛狀根培養(yǎng)不僅能生產(chǎn)喜樹堿，而且可把二次代謝物如喜樹堿等分泌至培養(yǎng)基中，利用現(xiàn)代生物技術(shù)與現(xiàn)代分離技術(shù)綜合開發(fā)喜樹和喜樹堿，這是喜樹資源的保護(hù)開發(fā)的新突破。本論文先對(duì)喜樹發(fā)根進(jìn)行培養(yǎng)，然后使用氯仿提取喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分，并用HPLC檢測法檢測其有效成分，檢測發(fā)現(xiàn)喜樹分泌在培養(yǎng)基中的次生代謝產(chǎn)物除了喜樹堿、羥基喜樹堿、白樺脂酸外，還含有其他有效成分。另外的氯仿提取法與樹脂吸附法對(duì)加了標(biāo)液的空白培養(yǎng)基進(jìn)行提取的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，證明了樹脂富集培養(yǎng)基中微量的喜樹堿的效果比氯仿提取的效果好，而且富集到的種類要比氯仿提取的多。這個(gè)實(shí)驗(yàn)為以后用樹脂作為吸附材料，從喜樹發(fā)根體系的培養(yǎng)基中富集喜樹堿做了很好的鋪墊。
關(guān)鍵詞：喜樹堿 喜樹發(fā)根培養(yǎng)基 氯仿提取 HPLC檢測


目 錄
1 緒論 1
1.1 前言 1
1.2 喜樹生物學(xué)特性與藥用價(jià)值 2
1.2.1 生物學(xué)特征 2
1.2.2 藥用價(jià)值 2
1.3 擴(kuò)大喜樹堿藥源途徑的研究 3
1.3.1 組織培養(yǎng)及喜樹細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 3
1.3.2 利用毛狀根培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)喜樹堿 4
1.3.2.1 發(fā)根農(nóng)桿菌的特性 4
1.3.2.2 毛狀根的轉(zhuǎn)化方法、培養(yǎng)和鑒定 5
1.4 光照對(duì)喜樹培養(yǎng)的影響 5
1.4.1 光照對(duì)毛狀根生長及其次生代謝產(chǎn)物合成因素的影響 5
1.4.2 光照對(duì)喜樹愈合組織生理及喜樹堿合成的影響 6
1.4.3 光強(qiáng)對(duì)喜樹幼苗葉片次生代謝產(chǎn)物喜樹堿的影響 6
1.5 大孔吸附樹脂吸附原理 6
1.6 喜樹堿的富集與檢測 7
1.7 本課題研究的內(nèi)容 7
2. 喜樹發(fā)根培養(yǎng) 7
2.1 喜樹枝條不同組織及基本培養(yǎng)基的篩選 7
2.2 不同種類、濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)喜樹莖段腋芽、不定根的誘導(dǎo) 9
2.3 發(fā)根農(nóng)桿菌感染喜樹莖的培養(yǎng) 10
3 喜樹發(fā)根培養(yǎng)基中次生代謝產(chǎn)物喜樹堿提取 11
3.1 試驗(yàn)材料與儀器 11
3.1.1 試驗(yàn)材料 11
3.1.2 試驗(yàn)儀器 11
3.1.3 色譜條件 11
3.2 試驗(yàn)方法 11
3.2.1 標(biāo)液的配置 11
3.2.2 喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分富集試驗(yàn) 12
4 HPLC法檢測喜樹堿等喜樹有效成分 12
4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定 12
4.2 空白養(yǎng)基中喜樹堿的抽濾氯仿萃取與樹脂吸附的對(duì)比 15
4.3 培養(yǎng)基中富集喜樹堿等有效成分的HPLC檢測結(jié)果 15
4.3.1 培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)物喜樹堿等有效成分的檢測 15
4.3.2 喜樹培養(yǎng)基經(jīng)抽濾處理后濾渣與濾液中喜樹堿含量的對(duì)比 16
4.3.3 喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分的檢測結(jié)果 17
5 總結(jié)與討論 20
5.1 結(jié)論 20
5.2 存在問題與展望 20
5.2.1 存在的問題 20
5.2.2 展望 21
參 考 文 獻(xiàn) 22
英 文 摘 要 24
致 謝 25



1 緒論
1.1 前言
喜樹堿是一種從喜樹中分離出來具有抗癌活性的生物堿。喜樹廣泛分布于亞洲，在我國分布尤其多，為中國特有樹種。我國的野生喜樹可以作為藥用的葉片和種子資源總量為2158.09t和134.99t。由于喜樹主要分布在人為活動(dòng)區(qū)，一直是毀林開田的砍伐對(duì)象，喜樹的野生種群已相當(dāng)少見。在我國，野生資源已經(jīng)處于瀕危狀態(tài)，在某些地方已經(jīng)絕跡，現(xiàn)存的少量的野生資源也存在滅絕的危險(xiǎn)，而且喜樹堿仍不能化學(xué)合成，所以喜樹資源仍是喜樹堿及其類似物的唯一來源。
面對(duì)野生喜樹資源已經(jīng)處于瀕危，且喜樹堿仍不能化學(xué)合成的殘酷現(xiàn)狀，利用現(xiàn)代生物技術(shù)與現(xiàn)代分離技術(shù)綜合開發(fā)喜樹和喜樹堿是喜樹資源的保護(hù)開發(fā)的新突破。Sakato、Arjon J等人的工作表明，通過細(xì)胞培養(yǎng)物中目標(biāo)產(chǎn)物含量很小，因此至今未有實(shí)際生產(chǎn)的應(yīng)用。發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)出的毛狀亙具有生長迅速、激素自養(yǎng)、生長條件簡單、次生代謝產(chǎn)物含量高且穩(wěn)定以及分化程度高、不易變異等特點(diǎn)，此外尚可以從毛狀根培養(yǎng)物中尋找新的化合物。因此毛狀根技術(shù)被認(rèn)為是一條利用生物技術(shù)生產(chǎn)代謝新的有效途徑。國內(nèi)外學(xué)者在這方面。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。


參 考 文 獻(xiàn)
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