PLRV的IC-RT-PCR和DAS-ELISA兩種檢測(cè)方法的比較

本文共計(jì)15頁(yè)，9353字；

摘要


馬鈴薯卷葉病毒主要分布在寄主植物的韌皮部?jī)?nèi)，提純過(guò)程復(fù)雜難以獲得令人滿意的產(chǎn)量，一般為0.4-1.3mg/kg組織葉片,限制了血清的大量制備;另一方面，也難以檢測(cè)出存在于韌皮部的馬鈴薯卷葉病毒，因此，采用一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法十分重要。
本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)DAS-ELISA、IC-RT-PCR、RT -PCR三種檢測(cè)方法的靈敏度的比較發(fā)現(xiàn)：IC-PCR的靈敏度要比DAS-ELISA的靈敏度高出100倍以上，操作比起RT-PCR也簡(jiǎn)單得多。它省去提取核酸這一煩鎖的步驟，而通過(guò)吸附在反應(yīng)管壁上的抗血清來(lái)誘捕葉片組織中的病毒粒體來(lái)合成cDNA，再進(jìn)行PCR反應(yīng)。IC-PCR可大大減少操作過(guò)程中污染的機(jī)會(huì)，對(duì)標(biāo)本有潔凈作用，可大大降低無(wú)關(guān)核酸的污染和清除抑物，并且有捕捉和富集標(biāo)本中病原體的作用，提高了PCR的特異性和敏感性，結(jié)果比較可靠。
DAS-ELISA的靈敏度和可信度主要受到抗血清的質(zhì)量的影響，其次還受到所取樣品的部位以及實(shí)驗(yàn)者操作的影響，因此容易出現(xiàn)假陽(yáng)性和漏掉真陽(yáng)性的情況。
關(guān)鍵詞：馬鈴薯卷葉病毒,DAS-ELISA,IC-RT-PCR RT-PCR,檢測(cè),比較, 靈敏度

ABSTRACT

PLRV is the main cause that leads to the potato’s degeneration. Aphids transmit PLRV in a persistent manner. The procedure for viral purification is complex, furthermore, the yield is as low as 0.4-1.3mg per 1kg leaf tissue in most case. This limits the large-scale preparation of antiserum. On the other hand, serological method is difficult to detect the PLRV efficiently. In this experience, two reverse transcriptase polymerase reaction (RT-PCR) methods (direct RT-PCR, immuno-capture RT-PCR) were evaluated and compared with DAS-ELISA in order to develop a more sensitive assay for PLRV. By using IC-RT-PCR, the test can be performed in a single tube. Compared with existing ELISA assays. PLRV particles from a variety of isolates were trapped

目錄：
1前言
1.1 馬鈴薯與馬鈴薯病毒
1.2 馬鈴薯病毒的診斷方法
1.3 馬鈴薯卷葉病毒及其為害
2材料和方法
2.1 材料
2.2方法
3結(jié)果與分析
3.1 DAS-ELISA的結(jié)果與分析
3.2 總核酸的提取
3.3 RT-PCR和IC-PCR的結(jié)果與要析
4結(jié)論和討論
4.1 結(jié)論
4.2 討論
部分參考文獻(xiàn)

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