F2選定群體混合樣品大尺度定位的定量分析


1.8萬字 45頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
圖位克隆首先進(jìn)行同線性測定及大尺度定位，然后通過3點(diǎn)測驗(yàn)確定突變基因所在染色體上的精確范圍以克隆基因。同線性測定及大尺度定位一般選用一小的分離群體，用基因組若干分子標(biāo)記進(jìn)行連鎖測驗(yàn)，根據(jù)測驗(yàn)結(jié)果確定所在的染色體。為減少工作量，常對分離群體的突變體的混合DNA樣品與F1代DNA樣品分子標(biāo)記比較研究，初步判斷連鎖標(biāo)記，然后進(jìn)行小群體的分子標(biāo)記單株檢測進(jìn)行連鎖測驗(yàn)以確認(rèn)突變體的連鎖標(biāo)記。
在F2偏分離混合DNA樣品分子標(biāo)記分析中，對應(yīng)親本擴(kuò)增條帶的相對含量代表著突變位點(diǎn)與該分子標(biāo)記的重組率，而該重組率常常需要借助單株基因型分析、通過連鎖測驗(yàn)獲得。在混合DNA樣品的分析中，親本對應(yīng)DNA條帶擴(kuò)增的強(qiáng)弱是群體基因型的代表，如果通過混合DNA樣品的定量分析得到連鎖測驗(yàn)的結(jié)果而避免單株基因型的檢測，此將進(jìn)一步極大地降低大尺度定位的強(qiáng)度。為實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)要解決兩個(gè)關(guān)鍵問題：（1） PCR產(chǎn)物即微量DNA的定量，（2） 基于混合樣品對應(yīng)親本DNA條帶相對擴(kuò)增量計(jì)算交換率。
核酸定量有很多種方法，其中鉬銻抗分光光度法定磷靈敏度高，所需儀器設(shè)備簡單，其可靠性與靈敏度可與real-time PCR相當(dāng)，通過系列實(shí)驗(yàn)先建立微量DNA檢測體系，可以在200 μL 0 - 100 ng的 DNA含量的反應(yīng)體系進(jìn)行定量分析。但是，微克級DNA樣品的消化處理十分困難，因此利用定磷法測定偏分離群體對應(yīng)親本擴(kuò)增能力目前是不能實(shí)現(xiàn)的。
為了實(shí)現(xiàn)混合DNA樣品的定量分析，我們又采用Scion Image 4.0.3.2圖像處理軟件對瓊脂糖電泳照片中Col、Ler、F1及偏分離DNA樣品的相應(yīng)分子標(biāo)記親本擴(kuò)增條帶進(jìn)行定量，進(jìn)而計(jì)算了3個(gè)突變體26號突變體、AP1突變體、5號突變體與相應(yīng)分子標(biāo)記C19587、C19679、NGA6、A21912、A25576、D1175、D7970、D1175、D7970的連鎖率分別是51%、0、0、10%、0、36%、32%。


關(guān)鍵詞：圖位克??；核酸定量；擬南芥