F2選定群體混合樣品大尺度定位的定量分析


1.8萬字 45頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
圖位克隆首先進行同線性測定及大尺度定位，然后通過3點測驗確定突變基因所在染色體上的精確范圍以克隆基因。同線性測定及大尺度定位一般選用一小的分離群體，用基因組若干分子標記進行連鎖測驗，根據(jù)測驗結(jié)果確定所在的染色體。為減少工作量，常對分離群體的突變體的混合DNA樣品與F1代DNA樣品分子標記比較研究，初步判斷連鎖標記，然后進行小群體的分子標記單株檢測進行連鎖測驗以確認突變體的連鎖標記。
在F2偏分離混合DNA樣品分子標記分析中，對應親本擴增條帶的相對含量代表著突變位點與該分子標記的重組率，而該重組率常常需要借助單株基因型分析、通過連鎖測驗獲得。在混合DNA樣品的分析中，親本對應DNA條帶擴增的強弱是群體基因型的代表，如果通過混合DNA樣品的定量分析得到連鎖測驗的結(jié)果而避免單株基因型的檢測，此將進一步極大地降低大尺度定位的強度。為實現(xiàn)這個目標要解決兩個關(guān)鍵問題：（1） PCR產(chǎn)物即微量DNA的定量，（2） 基于混合樣品對應親本DNA條帶相對擴增量計算交換率。
核酸定量有很多種方法，其中鉬銻抗分光光度法定磷靈敏度高，所需儀器設備簡單，其可靠性與靈敏度可與real-time PCR相當，通過系列實驗先建立微量DNA檢測體系，可以在200 μL 0 - 100 ng的 DNA含量的反應體系進行定量分析。但是，微克級DNA樣品的消化處理十分困難，因此利用定磷法測定偏分離群體對應親本擴增能力目前是不能實現(xiàn)的。
為了實現(xiàn)混合DNA樣品的定量分析，我們又采用Scion Image 4.0.3.2圖像處理軟件對瓊脂糖電泳照片中Col、Ler、F1及偏分離DNA樣品的相應分子標記親本擴增條帶進行定量，進而計算了3個突變體26號突變體、AP1突變體、5號突變體與相應分子標記C19587、C19679、NGA6、A21912、A25576、D1175、D7970、D1175、D7970的連鎖率分別是51%、0、0、10%、0、36%、32%。


關(guān)鍵詞：圖位克??；核酸定量；擬南芥