農(nóng)藥西維因間接酶聯(lián)免疫分析方法的建立

1.42萬字 32頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)


摘 要
本文以氨基甲酸酯類殺蟲劑西維因為研究對象，根據(jù)已合成的一種西維因結(jié)構(gòu)類似物的半抗原通過與載體蛋白（KLH，BSA，OVA）分別進行偶聯(lián)，制備免疫原(H-KLHH-BSA)和包被原（H-OVA）。通過免疫新西蘭大白兔，定期進行效價檢測，通過采血獲取效價和特性較高的抗血清并通過Protein A－Sepharose 4B作親合層析介質(zhì)純化抗血清得到特異性的西維因抗體，并初步建立了西維因的酶聯(lián)免疫分析方法。
本實驗選取6只新西蘭大白兔，其中1、2、3、4號兔子的免疫原采用的是DCC和NHS偶聯(lián)劑將半抗原與載體蛋白進行偶聯(lián)，12號載體為KLH蛋白，34號載體為BSA。5、6號兔子的免疫原采用EDC和NHS偶聯(lián)，載體蛋白為KLH。通過對新西蘭大白兔進行免疫發(fā)現(xiàn)，第五次加強免疫以后，3號抗血清效價和特異性達到一個相對較高的平臺期，取3號全血并采用Protein A－Sepharose 4B作親合層析介質(zhì)純化抗血清方法制備了針對西維因的抗體，其濃度為2.83mg/ml。
通過優(yōu)化抗體包被量，得到最佳抗體包被量為每孔1ug，采用間接競爭法初步建立了西維因ELISA檢測方法，得到IC50=3.58mg/kg，IC10=1.51mg/kg。



關(guān)鍵詞：西維因；完全抗原；抗體；酶聯(lián)免疫吸附分析