農(nóng)藥西維因間接酶聯(lián)免疫分析方法的建立

1.42萬(wàn)字 32頁(yè) 原創(chuàng)作品，已通過(guò)查重系統(tǒng)


摘 要
本文以氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑西維因?yàn)檠芯繉?duì)象，根據(jù)已合成的一種西維因結(jié)構(gòu)類似物的半抗原通過(guò)與載體蛋白（KLH，BSA，OVA）分別進(jìn)行偶聯(lián)，制備免疫原(H-KLHH-BSA)和包被原（H-OVA）。通過(guò)免疫新西蘭大白兔，定期進(jìn)行效價(jià)檢測(cè)，通過(guò)采血獲取效價(jià)和特性較高的抗血清并通過(guò)Protein A－Sepharose 4B作親合層析介質(zhì)純化抗血清得到特異性的西維因抗體，并初步建立了西維因的酶聯(lián)免疫分析方法。
本實(shí)驗(yàn)選取6只新西蘭大白兔，其中1、2、3、4號(hào)兔子的免疫原采用的是DCC和NHS偶聯(lián)劑將半抗原與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，12號(hào)載體為KLH蛋白，34號(hào)載體為BSA。5、6號(hào)兔子的免疫原采用EDC和NHS偶聯(lián)，載體蛋白為KLH。通過(guò)對(duì)新西蘭大白兔進(jìn)行免疫發(fā)現(xiàn)，第五次加強(qiáng)免疫以后，3號(hào)抗血清效價(jià)和特異性達(dá)到一個(gè)相對(duì)較高的平臺(tái)期，取3號(hào)全血并采用Protein A－Sepharose 4B作親合層析介質(zhì)純化抗血清方法制備了針對(duì)西維因的抗體，其濃度為2.83mg/ml。
通過(guò)優(yōu)化抗體包被量，得到最佳抗體包被量為每孔1ug，采用間接競(jìng)爭(zhēng)法初步建立了西維因ELISA檢測(cè)方法，得到IC50=3.58mg/kg，IC10=1.51mg/kg。



關(guān)鍵詞：西維因；完全抗原；抗體；酶聯(lián)免疫吸附分析