雞傳染性法氏囊病毒多抗原表位序列表達(dá)載體的構(gòu)建及原核表達(dá)

1.6萬字 35頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
雞傳染性法氏囊病是一種由雞傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Viruses，IBDV）引起的急性、接觸性禽類傳染病。IBDV基因組主要編碼VP1、VP2、VP3、VP4和VP5共5種多聚蛋白，其中VP2蛋白具有血清型特異性，包含了大部分負(fù)責(zé)誘導(dǎo)中和抗體的抗原決定簇，是IBDV主要的保護(hù)性抗原。
為了研制一種新的雞法氏囊病重組疫苗的抗原，本實(shí)驗(yàn)選取了VP2蛋白編碼基因上的三個(gè)抗原決定簇，設(shè)計(jì)了可以合成這三個(gè)抗原決定簇串聯(lián)序列(雞法氏囊病毒多抗原表位串聯(lián)肽核酸序列)的四條引物，利用SOE-PCR方法克隆得到雞法氏囊病毒多抗原表位串聯(lián)肽核酸序列。通過EcoR I和Sal I兩個(gè)酶切位點(diǎn)使該核酸序列插入原核表達(dá)載體(pET32a)。SDS-PAGE 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明雞法氏囊病毒重組多抗原表位序列可以在大腸桿菌中得到表達(dá)，表達(dá)量為19%。
另外，我們還對(duì)IBDV多抗原表位序列在大腸桿菌中的表達(dá)條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定了在不同IPTG的誘導(dǎo)濃度（0.5 mM，1 mM，1.5 mM，2mM，2.5 mM），不同菌體接種比例（0.5%，1%，1.5%，2%，2.5%），不同誘導(dǎo)時(shí)間（1h，2h，3h，4h，5h，6h），不同誘導(dǎo)轉(zhuǎn)速條件下（160rpm，180rpm，200rpm，220rpm)，IBDV 多抗原表位序列表達(dá)量的變化。
最終，本研究成功的構(gòu)建了IBDV多抗原表位序列的原核表達(dá)載體，并確定了最優(yōu)表達(dá)條件。


關(guān)鍵詞：雞法氏囊病毒（IBDV）；多抗原表位序列；載體；表達(dá)；優(yōu)化