芋螺毒素MⅦA在家蠶中的表達

1.42萬字 33頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)


摘 要
芋螺毒素ω-MⅦA能特異地阻斷鈣離子通道，阻止疼痛信號的傳導，以其為有效成分的Ziconotide已被FDA批準用于治療慢性疼痛。ω-MⅦA的合成目前主要采用的是固相合成法，但該方法產(chǎn)率低，合成成本高，不能完全滿足作為藥物商業(yè)化生產(chǎn)的要求。家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)是以家蠶核型多角體病毒（BmNPV）為載體，家蠶為宿主的昆蟲桿狀病毒表達載體系統(tǒng)，重組蛋白的表達水平高，經(jīng)修飾后生物學功能比較完整，能夠用作開發(fā)生物反應(yīng)器，成本低廉，易于產(chǎn)業(yè)化。
本文利用PCR技術(shù)從pUC18-MⅦA上克隆經(jīng)密碼子優(yōu)化的ω-MⅦA基因，用BamHⅠ和HindⅢ雙酶切后，連入供體質(zhì)粒pDUAL-EGFP，得到重組供體質(zhì)粒pDUAL-EGFP-MⅦA。經(jīng)測序驗證后，采用轉(zhuǎn)座法構(gòu)建了含有芋螺毒素MⅦA基因的重組BmNPV。經(jīng)多輪擴增后獲得了滴度為1.6×107pfu/mL的BV粒子。使用200 pfu的BV粒子注射五齡初家蠶，感染5天后，家蠶體表可觀察到綠色熒光。收集體表具綠色熒光的家蠶血液，通過醋酸扭體實驗發(fā)現(xiàn)，注射家蠶血液的小鼠無扭體現(xiàn)象，而對照組小鼠具有明顯的扭體現(xiàn)象，說明重組芋螺毒素ω-MⅦA具有鎮(zhèn)痛活性。本研究利用家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)成功表達了具鎮(zhèn)痛活性的重組ω-MⅦA，為芋螺毒素的生物合成提供了新的思路和方法。


關(guān)鍵詞：芋螺毒素，ω-MⅦA；桿狀病毒；家蠶；鎮(zhèn)痛活性