目的:
探討應(yīng)用HFB一40型旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器對(duì)構(gòu)建組織工程軟骨的影
響。
方法:
無菌條件下解剖分離3一5天齡胎兔四膚關(guān)節(jié)軟骨，將軟骨片剪碎
至約lmm3大小，再用0.25%的胰蛋白酶和0.2%的H型膠原酶依次消
化后獲取軟骨細(xì)胞。體外擴(kuò)增至第2代后，收集細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度
至4x107/ml，將所得軟骨細(xì)胞接種于一mmx4mmx4mm大小長方體聚
乳酸聚羚基乙酸聚合物(PLGA)支架上，培養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成A、
B兩組，每組10個(gè)支架。A組為實(shí)驗(yàn)組，培養(yǎng)于生物反應(yīng)器內(nèi);B
組為對(duì)照組，培養(yǎng)于普通培養(yǎng)瓶內(nèi)。A組生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)速維持在15一30
轉(zhuǎn)/分鐘，保持軟骨細(xì)胞一PLGA支架復(fù)合物在震蕩環(huán)境下保持懸浮狀
態(tài)，每2一3天換液50%一60%;B組軟骨細(xì)胞一PLGA支架復(fù)合物在靜
止的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。A、B兩組連續(xù)培養(yǎng)4周。4周后采用HE染色法
觀察組織工程軟骨細(xì)胞增殖及分布;甲苯胺藍(lán)染色觀察軟骨細(xì)胞硫酸
糖氨多糖(GAG)的分泌和分布;H型膠原免疫組織化學(xué)染色觀察
軟骨細(xì)胞H型膠原分泌和分布，并用Image一pr叩lus圖象分析系統(tǒng)對(duì)
H型膠原免疫組織化學(xué)染色切片行11型膠原半定量分析;并用1，9
南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文
二甲基亞甲藍(lán)法和小牛胸腺DNA法定量檢測軟骨細(xì)胞一PLGA支架
復(fù)合物的GAG和DNA含量。
結(jié)果:
A組軟骨細(xì)胞一PLGA支架復(fù)合物體積較大、較厚，表面光滑，
彈性和光澤也明顯優(yōu)于B組，兩組復(fù)合物匪染色組織學(xué)和甲苯胺藍(lán)
染色觀察結(jié)果顯示A組軟骨細(xì)胞的生長情況明顯優(yōu)于B組;A、B兩
組11型膠原染色面積百分比分另，{為(94.71士0.46)%和(63.87士1.39)
%:GAG含量分另，{為459.167士4.682和335.282士5.110:DNA含量分
別為14.25士0.147和10.84士0.112。兩組之間11型膠原染色面積百分比、
GAG含量和DNA含量差異均十分明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
結(jié)論:
應(yīng)用排B一40型旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器，能夠提供更加有牙」于軟骨細(xì)
胞在PLGA中生長的外部環(huán)境，促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，并增加H型膠原、
GAG等細(xì)胞外基質(zhì)的合成，更有牙j于組織工程軟骨的形成。
關(guān)健詞:
軟骨細(xì)胞排B一40型旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器組織工程