芋螺毒素mviia基因的合成與鑒定.doc


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芋螺毒素mviia基因的合成與鑒定,芋螺毒素mviia基因的合成與鑒定1.34萬字33頁原創(chuàng)作品,已通過查重系統(tǒng)摘要芋螺毒素是一類對(duì)細(xì)胞內(nèi)的離子通道和細(xì)胞上的受體具有高專一性的活性多肽。mvⅡa是從幻芋螺中提取的ω-芋螺毒素的基因,可作為神經(jīng)生物學(xué)探針,在鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護(hù)、抗驚厥、鎮(zhèn)咳等方面具有巨大的潛力。獲得芋螺毒素的傳統(tǒng)方法是從海洋動(dòng)物芋螺中提取天然產(chǎn)...


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芋螺毒素MVIIA基因的合成與鑒定
1.34萬字 33頁 原創(chuàng)作品,已通過查重系統(tǒng)
摘要
芋螺毒素是一類對(duì)細(xì)胞內(nèi)的離子通道和細(xì)胞上的受體具有高專一性的活性多肽。MVⅡA是從幻芋螺中提取的ω-芋螺毒素的基因,可作為神經(jīng)生物學(xué)探針,在鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護(hù)、抗驚厥、鎮(zhèn)咳等方面具有巨大的潛力。
獲得芋螺毒素的傳統(tǒng)方法是從海洋動(dòng)物芋螺中提取天然產(chǎn)物,但分離純化很困難且本身含量就少,因此難以獲得大量的芋螺毒素,而化學(xué)合成方法成本又太高。利用基因工程方法有望在大腸桿菌、昆蟲等異源表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)芋螺毒素的大量表達(dá)。
本研究借助生物信息學(xué)手段,對(duì)大腸桿菌B菌株和桿狀病毒BmNPV的密碼子使用頻率進(jìn)行分析。研究表明,在大腸桿菌B菌株中,CUA、CCU、CCC、CGA、AGA、AGG、AUA等密碼子的使用頻率相對(duì)較低,范圍在2.1‰-5.8‰。在BmNPV基因組中, UCA、CGG、AGG、GGA、GGG等密碼子的使用頻率相對(duì)較低,范圍在2.7‰-6.6‰。
在密碼子使用頻率分析的基礎(chǔ)上,本論文在不改變氨基酸序列的前提下,對(duì)MVIIA基因的22個(gè)密碼子進(jìn)行了優(yōu)化。采用連續(xù)PCR法合成密碼子優(yōu)化的芋螺毒素MVⅡA基因,經(jīng)BamHI和HindIII雙酶切后,連入克隆載體pUC18,經(jīng)藍(lán)白斑篩選,獲得含重組質(zhì)粒pUC18-MVIIA的陽性克隆,進(jìn)一步測序分析,結(jié)果顯示所合成的MVⅡA基因與密碼子優(yōu)化的MVⅡA基因序列完全一致。
綜上所述,本研究成功地完成了芋螺毒素MVⅡA基因的密碼子優(yōu)化和MVⅡA基因的合成與鑒定,為芋螺毒素MVⅡA基因在大腸桿菌和昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)分析奠定了基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞:芋螺毒素MVIIA,密碼子優(yōu)化,基因合成,大腸桿菌,桿狀病毒
1.34萬字 33頁 原創(chuàng)作品,已通過查重系統(tǒng)
摘要
芋螺毒素是一類對(duì)細(xì)胞內(nèi)的離子通道和細(xì)胞上的受體具有高專一性的活性多肽。MVⅡA是從幻芋螺中提取的ω-芋螺毒素的基因,可作為神經(jīng)生物學(xué)探針,在鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護(hù)、抗驚厥、鎮(zhèn)咳等方面具有巨大的潛力。
獲得芋螺毒素的傳統(tǒng)方法是從海洋動(dòng)物芋螺中提取天然產(chǎn)物,但分離純化很困難且本身含量就少,因此難以獲得大量的芋螺毒素,而化學(xué)合成方法成本又太高。利用基因工程方法有望在大腸桿菌、昆蟲等異源表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)芋螺毒素的大量表達(dá)。
本研究借助生物信息學(xué)手段,對(duì)大腸桿菌B菌株和桿狀病毒BmNPV的密碼子使用頻率進(jìn)行分析。研究表明,在大腸桿菌B菌株中,CUA、CCU、CCC、CGA、AGA、AGG、AUA等密碼子的使用頻率相對(duì)較低,范圍在2.1‰-5.8‰。在BmNPV基因組中, UCA、CGG、AGG、GGA、GGG等密碼子的使用頻率相對(duì)較低,范圍在2.7‰-6.6‰。
在密碼子使用頻率分析的基礎(chǔ)上,本論文在不改變氨基酸序列的前提下,對(duì)MVIIA基因的22個(gè)密碼子進(jìn)行了優(yōu)化。采用連續(xù)PCR法合成密碼子優(yōu)化的芋螺毒素MVⅡA基因,經(jīng)BamHI和HindIII雙酶切后,連入克隆載體pUC18,經(jīng)藍(lán)白斑篩選,獲得含重組質(zhì)粒pUC18-MVIIA的陽性克隆,進(jìn)一步測序分析,結(jié)果顯示所合成的MVⅡA基因與密碼子優(yōu)化的MVⅡA基因序列完全一致。
綜上所述,本研究成功地完成了芋螺毒素MVⅡA基因的密碼子優(yōu)化和MVⅡA基因的合成與鑒定,為芋螺毒素MVⅡA基因在大腸桿菌和昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)分析奠定了基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞:芋螺毒素MVIIA,密碼子優(yōu)化,基因合成,大腸桿菌,桿狀病毒
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