植物表達(dá)載體的改造

1.38萬字 35頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
植物表達(dá)載體在植物功能基因研究及植物轉(zhuǎn)基因育種方面發(fā)揮著重要作用。改造載體上的多克隆位點，構(gòu)建亞細(xì)胞定位載體和瞬間表達(dá)載體，對植物基因的克隆及研究具有重要意義。
本研究利用PCR技術(shù)從大腸桿菌BL21基因組DNA中擴(kuò)增LacZ’基因，進(jìn)而以LacZ’基因作為選擇性標(biāo)記，經(jīng)過兩次重組操作并結(jié)合藍(lán)白斑篩選，在植物表達(dá)載體pBI220上引入合適的酶切位點，獲得重組質(zhì)粒pBI220-MCS1，并進(jìn)行測序驗證，其新的酶切位點為BamHI-SmaI-SalI-SpeI-SacI。
本研究以含EGFP基因的pEGFP-N1為模板， PCR擴(kuò)增EGFP基因，經(jīng)SalI和SacI雙酶切，連入pBI200-MCS1，得到可用于亞細(xì)胞定位的重組質(zhì)粒pBI200-EGFP。
本研究還利用PCR技術(shù)從pBI121載體上擴(kuò)增了GUS基因表達(dá)盒，采用PstI和EcoRI雙酶切后，連入pUC18，得到重組質(zhì)粒pUC18-GUS。又以pBI200-MCS2為模板，PCR擴(kuò)增了該載體上含多克隆位點MCS2的表達(dá)盒，經(jīng)PstI和HindIII雙酶切后，連入pUC18-GUS，形成植物表達(dá)載體pGUS，該載體以GUS基因為報告基因，可用于植物功能基因的瞬間表達(dá)研究。
本論文改造和構(gòu)建了三個植物表達(dá)載體：pBI220-MCS1、pBI200-EGFP和pGUS，為植物功能基因的克隆與表達(dá)提供了便利。


關(guān)鍵詞：植物表達(dá)載體；多克隆位點；EGFP基因；GUS基因