利用一組SSLP分子標(biāo)記對(duì)幾個(gè)果莢發(fā)育突變體進(jìn)行初步定位

1.7萬字 37頁(yè) 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
擬南芥是植物科學(xué)模式生物之一。它在實(shí)驗(yàn)室里易于栽種，并且生長(zhǎng)周期只有6~8周，短時(shí)間的培育給遺傳研究帶來了很大的便利。我們通過誘變分離擬南芥果莢突變體，通過系列突變體分析全面解析果莢發(fā)育的生物學(xué)途徑。果莢發(fā)育是發(fā)育生物學(xué)研究的熱點(diǎn)，發(fā)育過程涉及細(xì)胞分化、生殖、信號(hào)傳到等基本的生物學(xué)問題，因此果莢發(fā)育的研究具有重要的理論意義。
理化突變體的定位克隆首先要進(jìn)行同線性測(cè)定、大尺度定位以及精細(xì)定位等過程才能克隆基因。在大尺度定位中常常采用作圖群體偏分離混合DNA樣品的基因型檢測(cè)進(jìn)行初步的同線性測(cè)定，然后進(jìn)行單株的基因型檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證以確定與突變體連鎖的分子標(biāo)記。因此我們首先選擇一組分子標(biāo)記，對(duì)他們的工作條件進(jìn)行優(yōu)化，如引物濃度、d NTP濃度、MgCl2濃度以及退火溫度。經(jīng)優(yōu)化，最終確定NGA63、NGA392、NGA280、CIW2、CIW3、NGA168、C4586、CIW11擴(kuò)增退火溫度采用50 ℃，40 s，2.0mM MgCl2；而NGA111與CIW4是55 ℃，40 s，1.5mM MgCl2。
擬利用這些分子標(biāo)記對(duì)13號(hào)、16號(hào)、32號(hào)、34號(hào)、19號(hào)與28號(hào)突變體進(jìn)行同線性測(cè)定，結(jié)果顯示13號(hào)突變體與NGA63分子標(biāo)記可能連鎖，16號(hào)突變體與NGA392分子標(biāo)記可能連鎖，32號(hào)突變體與CIW3分子標(biāo)記可能連鎖，28號(hào)突變體與CIW2、CIW11分子標(biāo)記可能連鎖。然后對(duì)13號(hào)突變體進(jìn)行單株基因型分析，初步定位的結(jié)果得到確證，即13號(hào)突變體與NGA63連鎖，其交換律是46.1%。
對(duì)于初步判定的4個(gè)突變體，其中13號(hào)突變體可以進(jìn)行定位的后續(xù)工作，其他3個(gè)突變體還需進(jìn)行單株驗(yàn)證工作。此外，對(duì)于同線性測(cè)定而言還需選擇第4與5染色體若干分子標(biāo)記進(jìn)行條件優(yōu)化，完善同線性測(cè)定試驗(yàn)平臺(tái)。

關(guān)鍵詞：擬南芥；SSLP；圖位克隆；同線性測(cè)定；果莢突變體